918博天娱乐官网提供的人骨肉瘤细胞MG63培养说明书，旨在为科研人员提供详细的细胞培养与处理指南。

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM培养基+10% FBS+1% P

传代方法：建议首次传代比例为1:2

备注：建议用无菌离心管收集瓶内培养基，以作对比培养。如对比效果不佳，请直接购买918博天娱乐官网提供的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，培养至良好状态并灌满完全培养液，封好瓶口是最佳的运输方式。处理步骤如下：

1. 用75%酒精对整个细胞瓶消毒，放置于超净台内进行严格的无菌操作。
2. 将细胞瓶放入37°C、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。
3. 在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数（如40x、100x、200x）保存；请注意，前三天的照片为重要售后依据，不提供照片的默认状态良好。
4. 传代时建议一瓶用原瓶完全培养基，另一瓶用自配的完全培养基进行对比培养，并在换液后松动瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将瓶内完全培养液收集至离心管，留5ml，以便继续培养。如果细胞密度超过80%，则可进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆、脱落。若是，立即加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37°C、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至培养瓶的80%覆盖率时，弃去培养液，PBS清洗一次；
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，并在显微镜下观察。待细胞收缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后转移至冻存管；
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱，如需转移至液氮罐中，需先在-80℃冰箱存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意防护），快速置于37°C水浴中解冻，直至没有结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，补加5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37°C、5% CO2培养箱；
4. 第二天换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能因为未能牢固粘附而出现脱落，属于正常现象。如细胞脱离较多，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。接下来，可以添加胰酶消化，并按照上述方法重悬和传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题时可重发的情况：

1. 运输途中出现细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等情况。
2. 细胞污染问题，需在48小时内提供真实实验结果，核实后重发。
3. 常温运输的细胞在静置24小时后、干冰存放的细胞在复苏24小时后，如大多数细胞未存活（需提供清晰照片），可重发。
4. 冷藏运输的细胞复苏后24小时内及未开封的常温细胞在静置4小时出现污染。
5. 若在7天内提出细胞活性问题，需提供台盼蓝染色法鉴定结果，核实后予以重发。
6. 产品收到当天及随后的2-3天内拍照，若未及时告知，则视为状态良好。

2）细胞出现问题时不予重发的情况：

1. 客户自造成细胞污染不予重发。
2. 操作不当导致细胞状态不佳不予重发。
3. 使用非推荐培养体系导致细胞状态不佳不予重发。
4. 未提供细胞培养前三天照片的，不予重发。
5. 细胞培养期间有其他处理的不予重发。
6. 收到细胞后2天内未及时告知的不予重发。

如遇具体情况，请与我们联系以进行协商处理。918博天娱乐官网始终致力于为科研提供最优质的细胞资源与服务。